Dans la détermination différentielle des entérobactéries et de certains vibrions, la réaction de Voges-Proskauer occupe une place particulière. Le test est basé sur la capacité des bactéries à fermenter le glucose pour former de l'acétoïne.
L'essence du processus de recherche
En microbiologie, la réaction de Voges-Proskauer est souvent utilisée pour différencier au sein de la famille des Yersinia les entérobactéries (y compris les agents pathogènes de la pseudotuberculose et de l'entérocolite), Escherichia coli et les aérobies sporulés. Le résultat est visualisé en colorant le milieu lorsque certains réactifs sont ajoutés.
Ce test appartient à la série IMViC (abréviation de Indol, Methyl Red, Voges-Proskauer i Citrate) - un groupe de tests d'identification comprenant des définitions différentielles:
- avec indole, basé sur la décomposition du tryptophane en indole, utilisé en présence d'un réactif de Kovacs ou d'Ehrlich;
- utilisationmethylroth, ou rouge de méthyle, qui détecte un pH donné à la suite de la métabolisation du glucose;
- Réactions de Voges-Proskauer pour la détection de l'acétyl-méthylcarbinol;
- utilisation de citrate avec changement de couleur suite à l'alcalinisation du milieu.
L'essence du processus est la visualisation de la présence de bactéries diagnostiquées en raison de l'interaction de l'acétoïne formée par elles avec la potasse caustique en présence d'oxygène. L'acétyl-méthylcarbinol est oxydé en diacétyle, qui forme un composé rouge vif ou rose. Augmentez la sensibilité du test en introduisant de l'alpha-naphtol avant d'ajouter de la potasse caustique.
Réglage test
La formulation de la réaction de Voges-Proskauer implique la culture préalable de micro-organismes. Une culture pure est ensemencée sur le milieu de diagnostic différentiel de Clark dont une variante est le bouillon de Clark (sans adjonction d'agar-agar). Soit un milieu prêt à l'emploi est utilisé, soit préparé indépendamment. Les ingrédients incluent:
- 5g de peptone;
- 5g de glucose;
- 5 g de phosphate de potassium dibasique;
- 1L distillat.
Pendant l'étude, la culture est ensemencée avec une anse bactériologique stérile en milieu liquide. Quantité - 5 ml dans un tube à essai plus contrôle. L'incubation est effectuée à une température de 35-37 degrés pendant deux jours. Ensuite, une étude de la réaction de Voges-Proskauer est réalisée par étapes:
- 2, 5 ml de bouillon de culture sont transférés dans un tube stérile.
- Ajoutez six gouttes d'alpha-naphtol (solution d'alcool à 5%).
- Ajouter 40 %une solution de potassium caustique à raison de 0,1 ml ou deux gouttes.
- L'agitation est effectuée en secouant doucement le tube à essai.
- Évaluer le résultat 15 minutes après le début de l'expérience.
Une autre méthode de test est l'incubation nocturne, dont la durée est réduite à 18 heures ou jusqu'à un jour. En plus de cette méthode, un test express est également utilisé: une culture est introduite en anse dans 2 ml de milieu, incubée pendant environ quatre heures, puis des réactifs sont ajoutés en quantité égale de 2-3 gouttes, mélangés et le le résultat est évalué après dix minutes.
Le contrôle est l'un des agents responsables de la pneumonie Klebsiella pneumoniae - souche atcc 13883.
Évaluation du résultat
Après le temps requis après l'ajout des réactifs (de 5 à 15 minutes), une couleur rouge cerise doit être observée avec une réaction positive prononcée, rouge et rose - avec une faible réaction positive. Aucun changement n'est enregistré comme résultat négatif.
L'excès de potasse caustique dans une solution peut donner une imitation d'une réaction positive, se colorant en une couleur cuivrée. Dans ce cas, la réponse négative de la colonie testée doit être enregistrée. De plus, une coloration au cuivre apparaît dans les cas où le bilan est donné une heure après l'introduction des réactifs.
Lors de l'évaluation du résultat, il faut tenir compte du fait que la culture prolongée des micro-organismes étudiés (plus de trois jours) entraîne une acidification du milieu, ce qui peut entraîner un résultat incorrect de l'étude. La réaction peut être légèrement positive oufaux négatif.
Exigences pour les réactifs de test
Les réactifs de Voges-Proskauer doivent répondre à des exigences telles qu'une concentration correcte, une grande pureté et une stabilité, ce qui est obtenu grâce à un stockage approprié.
Les kits de test prêts à l'emploi contiennent généralement des réactifs pour 100 utilisations ou plus et sont présentés dans des flacons en plastique ou en verre teinté. La qualité est régie par la documentation pertinente.
