Le bouillon de sélénite est un milieu d'enrichissement aux propriétés sélectives, conçu pour isoler les bactéries pathogènes du genre Salmonella (lat. Salmonella). Il est très efficace s'il est nécessaire de détecter ce pathogène particulier parmi d'autres représentants de la microflore intestinale. Le milieu est utilisé à la fois pour les diagnostics cliniques et à des fins sanitaires dans les tests alimentaires.
Caractéristiques générales
Le bouillon de sélénite est préparé à base d'une poudre, qui est un mélange homogénéisé de divers composants de la composition. La couleur de la matière sèche peut être jaune clair ou crème, selon le type de support. La poudre a des propriétés fluides.
Le bouillon de sélénite prêt est un milieu liquide transparent de couleur jaune clair. Cette masse est versée dans des conteneurs où l'ensemencement est effectué pour une incubation ultérieure.
Il existe trois principaux types de bouillon de sélénite:
- milieu pur - adapté à l'isolement de Salmonella à partir de matériel clinique et sanitaire;
- avec l'ajout de mannitol (bouillon à deux composants) - conçu pour fonctionner uniquement avec du matériel clinique;
- milieu cystéine-sélénite - peut être utilisé pour isoler Salmonella du biomatériel pathologique du patient (fèces, urine, etc.).
Ces types sont légèrement différents dans la composition et les fonctionnalités d'action.
La tâche principale du bouillon de sélénite est de favoriser l'accumulation de salmonelles, en inhibant la croissance de la microflore qui l'accompagne. Cela permet non seulement de détecter l'agent pathogène dans le matériau, mais également de le transférer ultérieurement sur gélose. Le milieu a été développé par Leifler, qui a été le premier à découvrir l'effet sélectif de la sélénite contre Salmonella.
Composition
Le bouillon de sélénite contient:
- hydrolysat de caséine;
- lactose;
- phosphate de sodium;
- hydrosélénite de sodium.
Le milieu sélénite-cystéine, en plus de ces composants, contient de la L-cystéine et de l'hydrogénophosphate de sodium. La composition du bouillon de mannitol diffère en ce qu'au lieu de l'hydrolysat de caséine, il comprend un digestat peptique de tissu animal. Il n'y a pas de lactose dans un tel environnement, mais il y a du mannitol. Ce dernier agit comme substrat fermentescible et apporte les propriétés tampons du bouillon.
Tous les composants de la poudre, à l'exception de l'hydrosélénite de sodium, sont conditionnellement appelés partie A, et la substance sélective est appelée partie B.
Le principe de fonctionnement et les propriétés de l'environnement
Le bouillon de sélénite fonctionne comme un support de stockageavec action sélective. L'effet sélectif est fourni en raison de la toxicité du sélénite, qui inhibe la croissance de la plupart des micro-organismes. Dans le même temps, les bactéries du genre Salmonella sont capables de restaurer ce composé, éliminant ainsi l'effet toxique sur leurs propres cellules. Cependant, à la suite de la réaction, un alcali se forme, ce qui réduit l'effet néfaste de la sélénite sur la croissance de la microflore associée, et il devient donc nécessaire de stabiliser le pH. Cette fonction est assurée par des bactéries qui fermentent le lactose avec formation d'acide. Le tamponnage du milieu est assuré par le phosphate.
Dans un bouillon à deux composants, le pH est stabilisé par le mannitol. Le milieu cystéine améliore l'effet sélectif contre Salmonella. Un tel bouillon est efficace pour contrôler le fond infectieux chez les patients présentant un stade non aigu de la maladie ou les convalescents.
La manifestation des caractéristiques de croissance des souches de référence dans le milieu peut être observée 12 à 24 heures après le début de l'incubation. Dans ce cas, Salmonella forme des colonies incolores.
Caractéristiques de cuisson
La préparation du milieu s'effectue en deux étapes. Tout d'abord, une solution est préparée avec un composant sélectif à raison de 4 grammes de sélénite de sodium par litre d'eau distillée. Ajoutez ensuite 19 grammes de la poudre principale (partie A). La solution est soigneusement mélangée et chauffée jusqu'à ce que les particules soient complètement dissoutes, après quoi elle est versée dans des tubes à essai stériles.
Lors de la cuisson, il est important de suivrerégime de température, puisque le milieu est instable à la surchauffe. La stérilisation du bouillon ne peut être effectuée qu'au bain-marie ou à l'aide d'un jet de vapeur. L'autoclavage du milieu est strictement interdit.
