Le terme "microscopie" a des racines grecques. En traduction, cela signifie l'étude d'objets à l'aide d'instruments de haute précision. Récemment, la fluorescence et la microscopie électronique sont devenues de plus en plus populaires.
Résolution
En vertu de cela, en règle générale, ils comprennent la distance minimale à laquelle des objets clairement distinguables peuvent être localisés. Le degré de pénétration dans le monde microscopique, la capacité à considérer la taille de l'élément étudié dépendra de la résolution de l'équipement. À fort grossissement, les limites des objets peuvent fusionner. En conséquence, il existe certaines limites au-delà desquelles l'approximation des éléments n'a plus de sens.
Méthode de microscopie par luminescence: mécanisme
Lorsque l'énergie absorbée par une substance est convertie en rayonnement visible, une lueur se produit. C'est ce qu'on appelle la luminescence. Ce phénomène est dû au fait que certaines substances, sous l'influence de la lumière, commencent à émettre des rayons avec une longueur d'onde différente (généralement grande). De plus, certains objets qui, sous un éclairage normal, ont une certainecouleur, sous l'influence de l'ultraviolet changer leur couleur.
Spécificités
Un objet qui ne peut pas être vu sous la lumière ultraviolette peut émettre un éclat brillant s'il est traité avec une substance spéciale. Dans celui-ci, les éléments brillent de différentes couleurs dans l'obscurité. La force du rayonnement est différente, mais, en règle générale, elle est faible. À cet égard, la microscopie à fluorescence est efficace dans une pièce sombre. Lors de l'utilisation de ce type d'étude, l'objet est vu dans la lumière qu'il émet lui-même. La composition chimique des tissus, des cellules affectera la qualité de l'étude. La microscopie à fluorescence est considérée comme une étude histochimique dans une certaine mesure.
Classification
La microscopie à fluorescence peut être primaire ou secondaire. Dans ce dernier cas, l'objet est traité avec des composés spéciaux qui donnent une lueur. La microscopie fluorescente primaire est basée sur la propre capacité de l'élément à émettre de la lumière.
Équipement
La microscopie à fluorescence est réalisée à l'aide de divers appareils. Leur élément principal est l'illuminateur. Il est équipé d'une lampe UV. De plus, les appareils utilisent un ensemble de filtres. Dans certains appareils, il existe de nombreuses configurations différentes. Selon la couleur utilisée pour exciter la luminescence - ultraviolet ou bleu, un filtre approprié est placé entre la source lumineuse et l'objet à l'étude. Étant donné que la lueur d'un élément microscopique est énergétiquement plus faible que la lumière excitatrice, elle ne sera capturée que sous une seule condition. Les rayons excédentaires de la source doivent être coupés par un filtre jaune-vert. Il est situé sur l'oculaire de l'appareil. L'effet de luminescence le plus prononcé sera lorsque le filtre coupera complètement les rayons émanant de la source lumineuse.
En quoi consiste une installation de lumière visible ? Il contient une source de lumière vive et un microscope biologique. Un filtre bleu-violet est placé entre le miroir de l'appareil et la lampe. Il peut s'agir de FS-1, UFS-3, etc. Le filtre jaune est placé sur l'oculaire du microscope. Avec leur aide, une lumière bleu-violet tombe sur l'objet. Il excite la luminescence. Mais cette lumière peut interférer avec la vue de la lueur. Par conséquent, sur le chemin de l'œil, il est coupé par un filtre jaune. L'éclairage est réglé selon la méthode Koehler, à une exception près. Le diaphragme du condenseur doit être complètement ouvert. Lors de l'examen, il est important d'utiliser une huile d'immersion non fluorescente. Pour réduire sa propre lueur, du nitrobenzène y est ajouté (2-10 gouttes / 1 g).
Microscopie à luminescence: applications en microbiologie
Les avantages de ce type d'étude sont:
- Capacité d'imagerie couleur.
- Éléments auto-émetteurs à contraste élevé sur fond noir.
- Détection et localisation de certains types de virus et microbes.
- La capacité d'étudier le transparent et l'opaqueorganismes vivants.
- Étude des processus vitaux dans leur dynamique.
Il faut aussi dire que la microscopie luminescente contribue au développement des meilleures méthodes d'histochimie et de cytochimie, de diagnostic express.
