La diversité des infections bactériennes nécessite une identification claire de l'agent pathogène et la définition de son espèce. Pour déterminer le type de micro-organisme, les microbiologistes sont aidés par ses propriétés tinctoriales - la sensibilité du microbe à la coloration avec divers colorants. Cette méthode vous permet d'explorer la morphologie de l'agent pathogène. Les propriétés tinctoriales des bactéries sont d'une grande importance pour la recherche pratique et théorique dans le domaine de la microbiologie.
Recherche microbienne
En bactériologie, il existe de nombreuses méthodes de coloration des micro-organismes. Tous sont basés sur les propriétés tinctoriales des bactéries. La coloration vous permet de déterminer leur forme, leur structure, leur taille, leur position relative. Cela permet de résoudre les problèmes de systématisation des types de micro-organismes de biologie générale et de microbiologie comparée.
Pourquoi les peindre
Les bactéries sont pratiquementorganismes transparents, et sans l'utilisation de coloration, ils sont peu visibles pour la microscopie conventionnelle. Vous pouvez utiliser des types spéciaux de microscopie (contraste de phase, champ sombre) pour étudier les objets, mais le moyen le plus simple consiste à colorer, après quoi les bactéries deviennent visibles dans un microscope optique conventionnel.
Préparation des échantillons
Quelle que soit la technique de coloration utilisée, il existe des règles uniformes pour la préparation de l'objet à l'étude. Les étapes suivantes sont obligatoires:
- Des instruments stériles font un frottis sur une lame de verre.
- L'échantillon est en cours de séchage. Cela se fait à température ambiante ou dans des armoires de séchage.
- Suivi de l'étape de fixation - les micro-organismes sont fixés au verre avec des composés spéciaux.
- Coloration appropriée - l'échantillon est recouvert de colorant pendant une période de temps déterminée, après quoi il est lavé.
- Séchage final - l'échantillon est de nouveau séché.
Les teintures les plus courantes
Les colorants les plus couramment utilisés sont à base d'aniline avec différentes valeurs d'acide (pH). La plupart des colorants sont des poudres diluées dans de l'alcool.
Les colorants dont les cations sont les agents colorants sont dits basiques (pH supérieur à 7). Ils peuvent être utilisés pour colorer les micro-organismes en rouge (magenta, safranine), violet (violet de méthyle, thionine), bleu (bleu de méthylène), vert (vert malachite), marron (chrysoïdine) et noir (induline).
Les colorants, dont les agents colorants sont des anions, sont dits acides (pH inférieur à 7). Ils coloreront l'échantillon en rouge (éosine), en jaune (picrine) ou en noir (nigrosine).
Il existe un groupe de colorants neutres (par exemple, la rhodamine B), où les cations et les anions agissent comme agents colorants.
Culture morte ou vivante
Les méthodes de coloration sont divisées en deux groupes selon la forme de vie de l'éprouvette.
- Coloration vitale (à vie). Cette méthode d'étude des propriétés des micro-organismes est utilisée dans l'étude des tissus vivants, ce qui permet d'observer les processus vitaux des microbes. Pour cette coloration, des colorants à faible toxicité et à haut pouvoir pénétrant sont utilisés.
- Coloration post-vitale. Il s'agit de la coloration des micro-organismes morts ou tués. Grâce aux propriétés tinctoriales des bactéries, les microbiologistes déterminent leur structure. C'est cette coloration qui est la plus largement utilisée.
Gram-positif et Gram-négatif
Ce sont ces caractéristiques des bactéries que l'on retrouve dans la notice de divers médicaments. Cette méthode d'étude des propriétés tinctoriales des bactéries repose sur l'utilisation du colorant violet de gentiane et la fixation de l'iode. C'est la technique de Hans Christian Gram, un médecin danois qui l'a proposée en 1884. À la suite de cette coloration, les bactéries sont divisées en deux groupes:
- Gram (+) - devient bleu(staphylocoques et streptocoques).
- Gram (-) - coloration rose à rouge (entérobactéries, salmonelle, E. coli).
Les différents résultats de coloration sont dus aux différentes propriétés tinctoriales des parois bactériennes. La méthode de la coloration de Gram reste la principale dans le diagnostic de certaines maladies infectieuses.
Autres techniques de coloration
Caractérisons quelques autres méthodes largement utilisées en bactériologie.
- Méthode de Ziehl-Nelson - détermine la résistance aux acides des bactéries. Il identifie les agents responsables de la tuberculose et de la mycobactériose.
- Technique de Romanovsky-Giemsa - colore en rouge les bactéries acidophiles (acide acétique et acide lactique) et en bleu basophiles (spirochètes et protozoaires).
- La technique de Morozov - colore les bactéries en brun et rend leurs flagelles visibles.
Les spores sont visibles
La coloration à la fuchcine de Tsiel vous permet de voir les spores bactériennes. Ayant une couleur rose après coloration, ils sont clairement visibles sur fond de bactéries bleues. Cette méthode est également un outil de bactériologie et revêt une grande importance pratique.
